NADPH-細胞色素C還原酶(NCR)
測定意義 細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,藥物在動物體內(nèi)的I相反響主要依賴細胞色素P450酶催化完成,許多藥物能誘導或抑止細胞色素P450的活性,從而惹起藥物的療效降低、中毒和殘留發(fā)作率的增加。NADPH-細胞色素C復原酶作為P450酶系的一員,擔任將氧化型P450轉(zhuǎn)變成復原型。 測定原理 NADPH-細胞色素c復原酶催化氧化型細胞色素c生成復原型細胞色素c,后者在550nm處有特征吸收峰,經(jīng)過測定復原型細胞色素c的增加速率,計算NADPH-細胞色素c復原酶活性。 測定操作: 1.分光光度計預熱30min,調(diào)理波長到550nm,蒸餾水調(diào)零。 2.試劑二在37℃水浴中預熱30min。 3.空白管:取1mL玻璃比色皿,依次參加50μL蒸餾水、900μL試劑二、50μL試劑三和10μL試劑四,疾速混勻后于550nm處測定2min內(nèi)吸光值變化,第10s和第130s吸光值分別記為A1和A2,△A空白管=A2-A1。 4.測定管:取1mL玻璃比色皿,依次參加50μL粗酶液、900μL試劑二、50μL試劑三和10μL試劑四,疾速混勻后于550nm處測定2min內(nèi)吸光值變化,第10s和第130s吸光值分別記為A3和A4,△A測定管=A4-A3。 留意:空白管只需求做一次。
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