脲酶（UE）活性檢測(cè)試劑盒 Urease (UE) Activity Assay Kit 
一、脲酶（UE）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品描述 脲酶是能夠?qū)Ｒ恍源呋蛩胤纸鉃殇@和碳酸的含鎳寡聚酶，廣泛分布于植物種子中，也存在于動(dòng)
物血液、尿液和部分微生物中，脲酶作為一種重要的生物制劑，在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、醫(yī)療、環(huán)境保護(hù)、
食品安全監(jiān)測(cè)和建材等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。
脲酶水解尿素產(chǎn)生的 NH3-N，在強(qiáng)堿性介質(zhì)中能夠與次氯酸鹽和苯酚反應(yīng)，生成水溶性藍(lán)色染料
靛酚藍(lán)，產(chǎn)物在 630 nm 處具有特征吸收峰，通過(guò)吸光值的變化即可表征脲酶的活性。
二、脲酶活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容圖示 
三、脲酶（UE）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品使用說(shuō)明 測(cè)定過(guò)程中所需要的儀器和試劑：可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿
器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。 1.粗酶液的制備（可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例）
①細(xì)菌或細(xì)胞：離心收集細(xì)菌或細(xì)胞至離心管內(nèi)，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）
為（500-1000）：1 的比例（建議 500 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴超聲破碎（功
率 300 W，超聲 3 s，間隔 7 s，總時(shí)間 3 min），4℃ 12000 g 離心 15 min，取上清置于冰上待測(cè)。
②組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱取 0.1 g 組織，加
入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 12000 g 離心 15 min，取上清置于冰上待測(cè)。
③血液（漿）、培養(yǎng)液等液體樣本：直接檢測(cè)或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測(cè)。 2.測(cè)定步驟
①分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 630 nm，蒸餾水調(diào)零。
②滅活酶液的制備：取適量粗酶液/液體樣本沸水浴處理 5-10 min（密封以防止水分散失），冷卻
至室溫后即為滅活酶液。 
吸光值測(cè)定：測(cè)定 630 nm 處吸光值，記為 A 測(cè)定、A 對(duì)照、A 標(biāo)準(zhǔn)和 A 空白；計(jì)算?A 測(cè)定=A
測(cè)定-A 對(duì)照，?A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。注：每個(gè)測(cè)定組均需設(shè)一個(gè)對(duì)照組，空白組只需測(cè)定 1-2 次。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：以 6.0、5.0、4.0、2.0、1.0、0.5 μg/mL 為橫坐標(biāo)（x），以其對(duì)應(yīng)的?A 標(biāo)準(zhǔn)為
縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將?A 測(cè)定帶入公式中得到 x（μg/mL）。
脲酶（UE）活性檢測(cè)試劑盒活性計(jì)算圖示
注釋：V 樣：反應(yīng)體系中加入粗酶液的體積，0.02 mL；V 提：粗酶液總體積，1 mL；V 酶促：
酶促反應(yīng)體系總體積，0.14 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，60 min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，
g；細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量：以百萬(wàn)計(jì)。
四、脲酶（UE）活性檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng) ①若A測(cè)定超出標(biāo)準(zhǔn)吸光值線性范圍：超出最高值建議將粗酶液或反應(yīng)混合液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行
測(cè)定；低于最低值可適當(dāng)增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改； ②顯色完成后應(yīng)在1 h內(nèi)完成測(cè)定，測(cè)定管顏色應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)管顏色一致（藍(lán)色），若顯色為黃色或綠
色，則表明NH3-N濃度過(guò)高，應(yīng)將粗酶液或反應(yīng)混合液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改； ③為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失，測(cè)定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)（以實(shí)際收到說(shuō)明書(shū)內(nèi)容為準(zhǔn)），
確認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)定，
過(guò)程中問(wèn)題請(qǐng)您及時(shí)與工作人員聯(lián)系。
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