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脂肪酸類 - 總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒說明書

總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒

Total Cholesterol (TC) Content Assay Kit

總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒說明書圖示1

一、總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒產(chǎn)品描述 

膽固醇(Cholesterol)又稱膽甾醇,是廣泛存在于動物體內(nèi)的一種環(huán)戊烷多氫菲衍生物,可作為 合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸及維生素 D 等生理活性物質(zhì)的重要原料,也是構(gòu)成細胞膜的 主要成分,總膽固醇(TC)是指所有脂蛋白所含膽固醇的總和,包括游離膽固醇和膽固醇酯。 膽固醇酯酶可催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),膽固醇氧化酶可 催化游離膽固醇氧化生成?4-膽甾烯酮和 H2O2,過氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚生成 紅色醌類化合物,產(chǎn)物在 500 nm 處具有特征吸收峰,通過吸光值變化即可定量檢測總膽固醇的含量。


二、總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容

總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒說明書圖示2

三、總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明

測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿 器、可調(diào)式移液器/多道移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養(yǎng)箱、異丙醇和蒸餾水。

  1. 總膽固醇的提?。筛鶕?jù)預(yù)實驗結(jié)果適當調(diào)整樣本量及比例)

    ①細菌或細胞:離心收集細菌或細胞至離心管內(nèi),按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL) 為(500-1000):1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴超聲破碎(功 率 300 W,超聲 2 s,間隔 3 s,總時間 3 min),4℃ 10000 g 離心 10 min,取上清置于冰上待測。

    ②組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g,加入 1 mL 提取液)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 10000 g 離心 10 min,取上清置于冰上待測。

    ③血清(漿)、培養(yǎng)液等液體樣本:直接測定或適當稀釋后再進行檢測。

  2. 測定步驟

    ①可見分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長至 500 nm,蒸餾水調(diào)零。

    ②TC 工作液的制備(現(xiàn)用現(xiàn)配):按試劑一:試劑二:試劑三= 1 mL:10 μL:10 μL 的比例配置。

    ③在 96 孔板或離心管中依次加入下列試劑:

吸光值測定:測定 500 nm 處吸光值,記為 A 測定、A 標準和 A 空白;計算?A 測定=A 測定-A 空白,?A 標準=A 標準-A 空白。注:空白管只需測定 1-2 次。

標準曲線的建立:以 3.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 μmol/mL 標準稀釋液濃度為橫坐標(x), 其對應(yīng)的?A 標準為縱坐標(y),繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b,將?A 測定帶入公式中得到 x(μmol/mL)。


 3.總膽固醇(TC)含量計算

總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒說明書圖示3

四、總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒注意事項 

①若?A測定超出標準線性吸光值范圍:高于最高值將待測樣本使用提取液適當稀釋后再進行測 定,低于最低值建議適當增加樣本量后再進行測定,計算時相應(yīng)修改; ②為保證結(jié)果準確且避免試劑損失,測定前請仔細閱讀說明書(以實際收到說明書內(nèi)容為準), 確認試劑儲存和準備是否充分,操作步驟是否清楚,且務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本進行預(yù)測定, 過程中問題請您及時與工作人員聯(lián)系。


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