elisa檢測(cè)試劑盒的三個(gè)基本原理 原鑫生物elisa綜合全類型試劑盒均價(jià)活動(dòng)：￥699 
ELISA檢測(cè)試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫分析試劑盒，該試劑盒具有特異性高、靈敏度好、穩(wěn)定性高及操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、食品藥品檢測(cè)、農(nóng)產(chǎn)品測(cè)定等檢測(cè)領(lǐng)域，了解elisa檢測(cè)試劑盒的基本原理在其日常的使用過(guò)程中是十分必要的，這讓實(shí)驗(yàn)操作者在使用ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)時(shí)的操作流程更加規(guī)范并減少錯(cuò)誤發(fā)生，進(jìn)而在提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度的同時(shí)提高了操作者對(duì)實(shí)驗(yàn)的了解程度。接下來(lái)就介紹一下ELISA檢測(cè)試劑盒的原理及相關(guān)注意事項(xiàng)：
一、elisa檢測(cè)試劑盒的基本原理
1.抗原或抗體的固相化：將抗原（抗體）與固體表面通過(guò)蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分產(chǎn)生的吸附力而進(jìn)行相互吸附，抗原（抗體）作為固相抗原（抗體），結(jié)合在固相載體表面的抗原（抗體）仍保持其免疫學(xué)活性，是ELISA檢測(cè)試劑盒中最為重要的基礎(chǔ)原理之一。 2.抗原或抗體的酶標(biāo)記：酶標(biāo)記抗原（或抗體）也是ELISA檢測(cè)試劑盒中的重要組成部分之一，抗原（或抗體）可通過(guò)共價(jià)鍵與酶結(jié)合形成酶標(biāo)記抗原（或抗體），酶標(biāo)記抗原或抗體同時(shí)保留了抗原（或抗體）的免疫學(xué)活性和酶的活性。酶標(biāo)記抗原（或抗體）在顯色反應(yīng)中起著重要的作用。 3.待測(cè)物結(jié)合反應(yīng)過(guò)程：在測(cè)定過(guò)程中，受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原（或抗體）進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)，使代測(cè)物質(zhì)也間接的固定在固相載體上?？梢允褂孟礈旆▽⒐滔噍d體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中游離的其他物質(zhì)進(jìn)行分離，然后將酶標(biāo)記的抗原（或抗體）加入到體系中，通過(guò)相關(guān)反應(yīng)間接地結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與代測(cè)標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量具有一定的比例關(guān)系，也就是說(shuō)酶量越多代表著代測(cè)物質(zhì)的數(shù)量越多。 4.顯色反應(yīng)的發(fā)生：酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，加入酶反應(yīng)的底物，根據(jù)加入酶反應(yīng)底物后發(fā)生的顏色反應(yīng)來(lái)判定免疫反應(yīng)是否發(fā)生和代測(cè)物是否存在，并且反應(yīng)中顏色的深淺是與代測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例關(guān)系的，所以底物顯色的程度能夠表示代測(cè)物質(zhì)的定性和定量檢測(cè)結(jié)果，代測(cè)物質(zhì)含量可以用紫外分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定分析。 5.ELISA試劑盒主要特征：ELISA檢測(cè)試劑盒法在原理上主要可以分為兩個(gè)方面，一是抗原與抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)原理基礎(chǔ)，二是酶標(biāo)抗原（或抗體）與底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)的信號(hào)放大原理，這兩個(gè)方面使ELISA檢測(cè)試劑盒法同時(shí)具有較高的特異性和敏感性。
二、elisa檢測(cè)試劑盒主要類型分類
1.雙抗體夾心法：ELISA試劑盒的雙抗體夾心法中最重要的就是固相抗體和酶標(biāo)抗體，首先將抗體固定在聚苯乙烯板上形成固相抗體，然后加入稀釋后的代測(cè)樣品，并進(jìn)行洗滌，洗去游離的其他物質(zhì)，洗滌好之后加入酶標(biāo)抗體，再次進(jìn)行洗滌，加入相關(guān)底物形成顯色反應(yīng)，進(jìn)而測(cè)出代測(cè)物質(zhì)（抗原）的含量。 2.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原：在使用ELISA試劑盒法測(cè)定小分子抗原或半抗原時(shí)，因小分子抗原或半抗原因位點(diǎn)的原因不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，所以采取競(jìng)爭(zhēng)法進(jìn)行檢測(cè)，其基本原理是標(biāo)本中的待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗原共同與固相抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，待測(cè)標(biāo)本中目標(biāo)抗原的含量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原就越少，顯色就會(huì)越淺，以此來(lái)對(duì)小分子抗原或半抗原的含量進(jìn)行測(cè)定。 3.間接法測(cè)抗體：ELISA試劑盒檢測(cè)抗體一般選擇使用間接法，其基本原理為將已知抗原包被在聚苯乙烯板上，進(jìn)行固定處理，將一定量的代測(cè)樣本稀釋液加入到已經(jīng)包被抗原的反應(yīng)板之中，代測(cè)抗體與固相抗原進(jìn)行特異性結(jié)合，然后加入酶標(biāo)記的抗抗體（二抗），二抗與代測(cè)抗體可以結(jié)合起來(lái)，這樣酶與底物產(chǎn)生的顯色反應(yīng)就可以反映出待測(cè)抗體的含量。
三、elisa檢測(cè)試劑盒的操作注意事項(xiàng)
1.試劑盒儲(chǔ)存：對(duì)ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)將其放入4℃-8℃冷藏室內(nèi)進(jìn)行保存，試劑盒從冷藏室中取出后應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后再進(jìn)行使用。 2.加樣：加樣時(shí)盡可能縮短加樣之間的時(shí)間間隔，并且進(jìn)行一次加樣的時(shí)間最好控制在5分鐘之內(nèi)，如果標(biāo)本數(shù)量過(guò)多，盡量使用排槍進(jìn)行加樣，可以縮短加樣操作時(shí)間，減少實(shí)驗(yàn)誤差。 3.實(shí)驗(yàn)操作：嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，并且保證操作臺(tái)及實(shí)驗(yàn)環(huán)境的整潔與無(wú)菌，實(shí)驗(yàn)后的所有樣品，洗滌液及廢棄物均按照傳染物進(jìn)行處理。
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