一、什么是高效液相色譜？ 高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。
特點： 高效液相色譜法有“四高一廣”的特點： ①高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。 ②高速：分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時。 ③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 ④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數(shù)量級。 ⑤應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。 ⑥柱子可反復(fù)使用：用一根柱子可分離不同化合物 ⑦樣品量少、容易回收：樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。 此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應(yīng)”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
二、什么是生物胺？ 生物胺(biogenic amine，BA)是一類具有生物活性含氮的低分子量有機化合物的總稱?？煽醋魇前狈肿又?-3個氫原子被烷基或芳基取代后而生成的物質(zhì)，是脂肪族，酯環(huán)族或雜環(huán)族的低分子量有機堿，常存在于動植物體內(nèi)及食品中。 生物胺是一類具有生物活性、含氨基的低分子質(zhì)量化合物。大多數(shù)食品中都含有生物胺，這些生物胺主要由微生物氨基酸脫羧酶作用于氨基酸脫羧而生成。適量生物胺可促進人體的正常生理活動，而過量攝入會產(chǎn)生不良反應(yīng)。 生物胺（biogenic amine，BA）是一類具有生物活性、含氨基的低分子質(zhì)量有機化合物的總稱。可看作是氨分子中1-3個氫原子被烷基或芳基取代后而生成的物質(zhì)，是脂肪族，酯環(huán)族或雜環(huán)族的低分子量有機堿，常存在于動植物體內(nèi)及食品中。 它們廣泛存在于食品中，也是合成荷爾蒙、生物堿、核苷酸、蛋白質(zhì)和芳香類化合物等的前體物質(zhì)。適量攝入生物胺能促進生長、增強代謝活力、增強免疫力和清除自由基等，但是過量攝入生物胺則會引起頭疼、腹部痙攣、嘔吐等不良生理反應(yīng)。
生物胺是生物體內(nèi)正常的活性成分，在體內(nèi)起著重要的生理作用。精胺、亞精胺、腐胺和尸胺是生物體內(nèi)細胞重要的組成部分，在調(diào)節(jié)DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成及生物膜穩(wěn)定性方面起著重要的作用，另外精胺對小腸也具有調(diào)節(jié)作用；色胺能調(diào)節(jié)血壓；苯乙胺可以調(diào)節(jié)去甲腎上腺素水平和增加血壓；酪胺具有顯著的抗氧化作用，可以增加心率、血壓和血糖濃度等 ；組胺是另一種重要的生物胺，其參與局部免疫反應(yīng)以及調(diào)節(jié)腸道生理功能，并參與炎癥反應(yīng)，另外組胺能調(diào)節(jié)白血細胞和一些蛋白質(zhì)的數(shù)量，組胺還作為神經(jīng)遞質(zhì)行使功能。已知組胺在人體內(nèi)具有23 種不同的生理功能 ，而且不斷有其新功能的報道。 生物胺也是一類對多種行為有潛在效應(yīng)的神經(jīng)遞質(zhì)。分為兒茶酚胺類（多巴胺、去甲腎上腺素、腎上腺素）、吲哚胺類（5-HT）和咪唑胺類（組胺）。釋放類型分突觸釋放和旁釋放。生物胺和其受體是多數(shù)有精神作用功能的分子和精神類藥物的作用靶點。
生物胺存在于多種食品尤其是發(fā)酵食品(如奶酪、葡萄酒、啤酒、米酒、發(fā)酵香腸、調(diào)味品）水產(chǎn)品及肉類產(chǎn)品等中。有人認為葡萄酒中的組胺及其它生物胺可以作為衡量葡萄酒生產(chǎn)過程中衛(wèi)生條件好壞的一個主要指標(biāo)。水產(chǎn)品、肉類制品等蛋白含量豐富的食品中生物胺含量與其質(zhì)量密切相關(guān)，有望成為評價此類食品鮮度的一個重要指標(biāo)。
以上就是生物胺類液相高效色譜檢測的操作內(nèi)容和注意事項了，看到這里想必大家會更感興趣了吧，想了解更多內(nèi)容即可登錄上海原鑫生物科技有限公司http://www.sdkaiwen.com/daice-30-1-1.html尋求專業(yè)ELISA試劑盒操作的研究人員進行咨詢。 |
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