什么是氮代謝類生理生化檢測服務?
一、氮代謝是什么? 氮代謝是氨的同化及蛋白質(zhì)等有機氮化合物的合成、分解的轉(zhuǎn)化過程。同時它也是植物的基本生理過程之一,參與地球化學循環(huán)的重要組成部分,植物氮素同化的主要途徑是經(jīng)過硝酸還原為銨后直接參與氨基酸的合成與轉(zhuǎn)化,期間硝基還原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酰胺合酶(GOGAT)、天冬酰胺轉(zhuǎn)氨酶(AspAT)等關(guān)鍵酶參與了催化和調(diào)節(jié),以氨基酸為主要底物在細胞中合成蛋白質(zhì),再經(jīng)過對蛋白質(zhì)的修飾、分類、轉(zhuǎn)運及儲存等,成為植物有機體的組成部分,同時與植物的碳代謝等協(xié)調(diào)統(tǒng)一,共同成為植物生命活動的基本過程。
氮代謝=攝入氮-排出氮(糞氮+尿氮+經(jīng)皮膚排出的氮) 二、怎么檢測氮代謝? 氮代謝是指氮素及含氮物質(zhì)的同化、異化和排泄,總稱為氮素代謝。我們采用Agilent 1260 Infinity型高效液相色譜儀對樣品進行分離,結(jié)合DAD檢測器對樣品進行鑒定或采用Thermo Scientific的U3000快速液相色譜對樣品進行分離,結(jié)合Thermo Scientific? Q Exactive?對樣品進行鑒定,可高效、精準的檢測氮代謝物的含量變化。目前可檢測的氮代謝物包括尿素、肌氨酸酐、肌酸等。對于常見氮代謝物或以上氮代謝物的同類物質(zhì),可結(jié)合標樣進行檢測,對于稀有的氮代謝物分子,如提供標準樣品,百泰派克可提供定制檢測。對于氮代謝過程所需要的關(guān)鍵酶,百泰派克可提供試劑盒測定服務。
三、樣品制備 植物氮代謝物的提取方法(此部分涉及到公司的核心工藝,以下提供常規(guī)的提取工藝) 1)稱量約20 mg的樣品; 2)液氮研磨; 3)加入2 mL的甲醇超聲提取30 min; 4)離心,取1.5 mL濾液; 5)旋干,加入0.5 mL甲醇復溶; 6)0.45 μm的微孔濾膜過濾,用HPLC-MS檢測。 動物氮代謝物的提取方法(以尿液為例): 1)取新鮮的晨尿2 mL; 2)8000 rpm離心5 min; 3)取1.5 mL上清液; 4)用乙酸銨緩沖液稀釋10倍; 5)0.45 μm的微孔濾膜過濾,用HPLC檢測
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