上海原鑫生物科技從事科研試劑的優(yōu)質(zhì)企業(yè)。該文章詳細(xì)的介紹了人白細(xì)胞介素6elisa試劑盒的檢測(cè)步驟、結(jié)果判定、參數(shù)和常見問題及解決辦法這四個(gè)方面。本文僅供于科研研究，不得用于臨床試驗(yàn)！ 九、檢測(cè)步驟 1 按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，在標(biāo)準(zhǔn)品與樣本孔中加樣100ul，空白對(duì)照不加 2 25℃避光孵育2h 3 棄去液體，用洗滌液清洗4次，每次每孔至少加洗滌液300ul，洗完后吸水紙上拍干 4 加入酶標(biāo)抗體溶液100ul，空白對(duì)照不加，25℃避光孵育1h 5 同步驟3 6 每孔加入底物A、B各50ul，25℃避光孵育20min，顯色淺可適當(dāng)延長孵育時(shí)間 7 加入終止液50ul，10min內(nèi)在450nm波長處測(cè)OD值
十、結(jié)果判斷 1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測(cè)定 OD 值。 2.計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均 OD 值：每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值 3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中IL-6含量可通過對(duì)應(yīng)OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。 4. 若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。
十一、參數(shù)表征 1.數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線
| Concentration(pg/ml) | OD1 | OD2 | 空白 | 0 | 0 | 0 | S1 | 5.47 | 0.153 | 0.135 | S2 | 10.94 | 0.204 | 0.211 | S3 | 21.88 | 0.296 | 0.301 | S4 | 43.75 | 0.462 | 0.485 | S5 | 87.5 | 0.787 | 0.775 | S6 | 175 | 1.358 | 1.350 | S7 | 350 | 2.153 | 2.172 |
2. 準(zhǔn)確度：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R>0.95 1. 檢測(cè)范圍：5.47-350pg/ml(如超出檢測(cè)范圍，需將樣本稀釋后檢測(cè)) 2. 靈敏度：≤5.47pg/ml 4 特異性：不與其他可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng) 5 重復(fù)性：變異系數(shù)≤15% 6 儲(chǔ)存條件：2-8℃冷藏 7 有效期：6個(gè)月
十二、常見問題及解決辦法
問題 | 可能原因 | 解決方法 | 高背景或陰性 | 洗板不充分 | 將洗滌液注入反應(yīng)孔充分洗滌，徹底拍干孔中液體 | 酶結(jié)合物過量 | 檢查酶稀釋度，按說明書標(biāo)識(shí)的稀釋度稀釋 | 底物污染 | 加底物前檢查底物是否為透明無色，請(qǐng)勿用變藍(lán)的底物，重新用新的底物試驗(yàn) | 陰性對(duì)照孔被陽性對(duì)照污染 | 注意洗滌時(shí)不要把洗液溢出孔外，不使陰陽對(duì)照孔液體漣接一起 | 不同批次試劑混用 | 檢查試劑批號(hào)，請(qǐng)勿用不同批次試劑 | 顯色信號(hào)弱 | 試劑過期 | 檢查試劑盒有效期，請(qǐng)勿用過期試劑 | 孵育時(shí)間過短 | 按說明書中規(guī)定的時(shí)間孵育 | 試劑污染 | 檢查試劑是否污染，請(qǐng)勿用污染的試劑 | 酶標(biāo)儀濾光片不匹配 | 檢查酶標(biāo)儀設(shè)置及濾光片是否匹配 | 試劑盒平衡不充分 | 確保試劑盒試驗(yàn)前平衡至室溫 | 顯色時(shí)間不夠 | 增加底物顯色時(shí)間 | 無顯色信號(hào) | 檢測(cè)抗體、酶、或顯色劑漏加 | 檢查試驗(yàn)操作流程，重復(fù)試驗(yàn) | 酶被疊氮鈉污染 | 請(qǐng)使用重新配制的試劑 | 試劑添加順序有誤 | 檢查復(fù)核試驗(yàn)添加順序、流程，重復(fù)試驗(yàn) | 標(biāo)曲佳但樣品孔無信號(hào) | 樣品中靶標(biāo)物含量低或樣品中無靶標(biāo)物 | 設(shè)置陽性對(duì)照，重復(fù)實(shí)驗(yàn) | 樣品基質(zhì)效應(yīng)影響檢測(cè) | 重新稀釋樣品后復(fù)測(cè) | 標(biāo)曲佳但樣品信號(hào)偏高 | 樣品中待檢物含量超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍 | 重新稀釋樣品后復(fù)測(cè) | 邊緣效應(yīng) | 孵育溫度不均衡 | 孵育時(shí)每步均使用新的封板膠紙，避免在環(huán)境溫度變化大的地方孵育，勿疊放反應(yīng)板 |
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