人腫瘤壞死因子α ELISA試劑盒說明書（一） 
上海原鑫生物科技從事科研試劑的優(yōu)質(zhì)企業(yè)。該文章詳細(xì)的介紹了人腫瘤壞死因子α ELISA試劑盒的背景、檢測原理、注意事項、安全提示、試劑盒組成及儲蓄和實驗器材這六個方面。本文僅供于科研研究，不得用于臨床試驗！ 一、背景簡介 腫瘤壞死因子α（Yumor necrosis factor-aipha）又稱TNF、TNFA或TNFSF2,是TNF超級家族的原型細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、調(diào)亡、脂質(zhì)代謝和凝血等多種生物學(xué)過程。兩種受體，TNF-R1（TNF受體1型；CD12a；p55/6）和TNF-R2（TNF受體2型；CD12b；p75/8）與TNF-α結(jié)合。TNF-α蛋白主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，大量的這種細(xì)胞因子在脂多糖、其他細(xì)菌產(chǎn)物和白細(xì)胞介素-1（IL-1）的作用下釋放。腫瘤壞死因子α（TNF-α）參與腫瘤的發(fā)生，因此被認(rèn)為是腫瘤治療中的一種分子機制。
二、檢測原理
酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）是一種固相夾心ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）。它利用在96孔板上包被人腫瘤壞死因子α的單克隆抗體，將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本添加到孔中，使腫瘤壞死因子α與固定化抗體結(jié)合，然后加入辣根過氧化物酶結(jié)合的小鼠抗人腫瘤壞死因子α的單克隆抗體，產(chǎn)生抗原-抗體-抗原的“三明治”結(jié)構(gòu)。再次清洗并加入TMB基質(zhì)溶液，其產(chǎn)生的顏色深淺與樣品中人腫瘤壞死因子α的含量成線性關(guān)系。結(jié)束酶反應(yīng)，添加停止溶液，并在450nm處讀取微孔吸光度。
三、注意事項
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。 2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品請當(dāng)天使用。 3. 試劑盒使用前請在室溫下復(fù)溫 30 min，配置試劑請充分混勻。 4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測。 5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜，及潔凈塑料容器。 6. 檢測抗體HRP酶結(jié)合物溶液為即用型，請于2-8℃保存，禁止冷凍保存。 7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液，顯色液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。 8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
四、安全提示
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免試 劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物 實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
五、試劑盒組成及儲存
試劑盒組成 
六、自備實驗器材
1． 酶標(biāo)儀 2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl 3． 洗板機 4． 37℃孵育箱 5． 超純水，去離子水 6． 一次性稀釋用聚丙烯試管
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