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| 人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)ELISA Kit試劑盒/測試盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號(hào)：CK-E10515
規(guī)格：48T/96T
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人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)ELISA Kit試劑盒/測試盒 
人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)ELISA Kit 詳細(xì)信息 貨號(hào)：CK-E10515 品牌： 原鑫生物 供應(yīng)商：上海原鑫生物科技有限公司 檢測限： / 檢測方法： 酶聯(lián)免疫法雙抗夾心法 應(yīng)用： ELISA 適應(yīng)物種： 人/動(dòng)物/植物 樣本： 血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織液等 規(guī)格： 96T/48T
【實(shí)驗(yàn)原理】
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。 試劑盒組成及試劑配制 1、酶聯(lián)板：一塊（96孔；48孔） 2、標(biāo)準(zhǔn)品：2瓶 3、樣品稀釋液：1×20ml/瓶 4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液：1×10ml/瓶 5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液：1×10ml/瓶 6、生物素標(biāo)記抗體：1×120μl/瓶（1：100） 7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素：1×120μl/瓶（1：100） 8、底物溶液：1×10ml/瓶 9、濃洗滌液：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 10、終止液：1×10ml/瓶
【實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制】
1、儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。 2、洗液的配制：按比例配制洗液備用。
【樣品收集、處理及保存】
1、細(xì)胞培養(yǎng)上清： 適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 2、細(xì)胞： 用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。 3、血清： 在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。 4、血漿： 應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 5、體液： 包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 6、組織標(biāo)本： 切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000rmp離心20分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 7、保存： 如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
【操作步驟】
1、取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。 2、分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔，1個(gè)空白對(duì)照 3、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6只，依次編好號(hào)碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul 加入一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。 4、加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 5、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 6、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 7、加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。 8、溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。 9、洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙徹底拍干。 10、顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。 11、終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。 12、讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。 注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。
【數(shù)據(jù)計(jì)算】
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，即為樣品的實(shí)際濃度。 六．注意事項(xiàng)： 1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。 2）加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免第一孔與*一孔間的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。 3）孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。 4）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。 5）建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
研發(fā)、生產(chǎn)科研產(chǎn)品：
ELISA試劑盒：多種屬、1000多種指標(biāo)：人、大小鼠、通用、牛、兔、山羊、倉鼠、豬、馬、雞、犬、豚鼠、猴、綿羊
抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗1萬余種，二抗100多種；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明專利，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白1000余種。 在線聯(lián)系：（周經(jīng)理） 17621047120 QQ：2441609688（任經(jīng)理）
官方電話： 400-788-2680 更多elisa試劑盒：http://www.sdkaiwen.com/product-32-104-1.html
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400-788-2680
