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| 植物中脂氧合酶（LOX）活性檢測(cè)試劑盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號(hào)：AUKT-85559
規(guī)格：70T/50S
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植物中脂氧合酶（LOX）活性檢測(cè)試劑盒 Plant Lipoxidase (LOX) Activity Assay Kit 一、產(chǎn)品描述 脂氧合酶（LOX）是一種廣泛存在于植物中含非血紅素鐵的氧化還原酶，作為植物十八碳酸代謝 途徑的關(guān)鍵酶，能夠?qū)Ｒ恍源呋嘣伙柡椭舅岬募友醴磻?yīng)，生成具有共軛雙鍵的過(guò)氧化氫物，直 接或間接參與植物的生長(zhǎng)、發(fā)育、成熟和衰老的調(diào)控過(guò)程，對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育及對(duì)環(huán)境脅迫的反應(yīng)具有 重要的影響。 脂氧合酶能夠催化亞油酸氧化，產(chǎn)物在 234 nm 處具有特征吸收峰，通過(guò)吸光值的變化速率即可 表征脂氧合酶的活性。
二、產(chǎn)品內(nèi)容
注：試劑二瓶?jī)?nèi)含棕色離心管，取 0.5 mL 試劑一將離心管中固體充分溶解后洗入棕色瓶中即可。
三、產(chǎn)品使用說(shuō)明
測(cè)定過(guò)程中所需要的儀器和試劑：紫外分光光度計(jì)、1 mL 石英比色皿（光徑 10 mm）、研缽/勻 漿器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。 1.植物中脂氧合酶（LOX）的提?。筛鶕?jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例）
按照樣本質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱(chēng)取 0.1 g 組織，加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴研磨至勻漿（或?qū)颖臼褂靡旱心ズ蠹尤胩崛∫夯旌暇鶆颍?℃ 15000 g 離心 20 min，取上清即為粗酶液，置于冰上待測(cè)。
2. 測(cè)定步驟
①紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 234 nm，蒸餾水調(diào)零。 ②試驗(yàn)前將試劑一 25℃預(yù)熱 30 min 以上。 ③在 1 mL 石英比色皿中依次加入下列試劑： 
吸光值測(cè)定：①迅速混勻并開(kāi)始計(jì)時(shí)，測(cè)定 15 s 時(shí) 234 nm 處吸光值，記為 A1 測(cè)定和 A1 空白； ②測(cè)定 75 s 時(shí) 234 nm 處吸光值，記為 A2 測(cè)定和 A2 空白；③計(jì)算?A 測(cè)定=A2 測(cè)定-A1 測(cè)定，?A 空 白=A2 空白-A1 空白，?A=?A 測(cè)定-?A 空白。注：空白組只需測(cè)定 1-2 次。
3.脂氧合酶（LOX）活性計(jì)算
注釋：V 樣：反應(yīng)體系中加入粗酶液的體積，0.1 mL；V 樣總：粗酶液總體積，1 mL；V 反總： 反應(yīng)體系總體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，60 s=1 min； ?A=?A 測(cè)定-?A 空白。
四、注意事項(xiàng)
①提取和測(cè)定過(guò)程均需在冰上進(jìn)行以免酶失活，粗酶液制備完成后需當(dāng)日完成測(cè)定； ②本方法采用速率法測(cè)定酶活：準(zhǔn)確在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)完成吸光值測(cè)定，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性； ③若 A2 測(cè)定＞2.5 或?A＞1.2，建議將粗酶液使用試劑一稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改； ④為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失，測(cè)定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)（以實(shí)際收到說(shuō)明書(shū)內(nèi)容為準(zhǔn)）， 確認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)定， 過(guò)程中問(wèn)題請(qǐng)您及時(shí)與工作人員聯(lián)系。
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