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品牌:原鑫生物
貨號:YX-XQ-Q22154
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血清素/5-羥色胺(ST/5-HT)elisa試劑盒采用競爭ELISA法。用ST/5-HT抗原包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的ST/5-HT與包被的ST/5-HT競爭生物素標記的抗ST/5-HT單抗上的結合位點,游離的成分被洗去。加入辣根過氧化物酶標記的親和素,生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,ST/5-HT濃度與OD450值之間呈反比,通過繪制標準曲線計算出樣品中ST/5-HT的濃度。


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血清素/5-羥色胺(ST/5-HT)elisa試劑盒方法: 我們測量了來自 Kras G12D/+ /Trp53 R172H/+ 的胰腺中調節(jié) 5-HT 合成、包裝和降解的蛋白質水平/Pdx1-Cre (KPC) 小鼠,它們會發(fā)生胰腺腫瘤,以及 PDAC 細胞系和包含 81 個人類 PDAC 樣本的組織微陣列。我們還通過對包含 311 個 PDAC 樣本的組織微陣列的免疫組織化學分析,分析了參與 5-HT 合成和降解的蛋白質的表達水平,以及與患者存活時間相關的表達水平。通過ELISA分析14個匹配的PDAC腫瘤和非腫瘤組織中的5-HT水平。PDAC細胞系與5-HT一起溫育并測量細胞存活和細胞凋亡。我們分析了 PDAC 細胞中 5-HT 受體 HTR2B 的表達以及受體激動劑和拮抗劑的影響,以及小發(fā)夾 RNA 的 HTR2B 敲低。我們確定了 5-HT 刺激對 BxPC-3 細胞基因表達譜的影響。通過免疫熒光和免疫沉淀分析以及通過測定細胞外酸比、葡萄糖消耗和乳酸產(chǎn)生來評估通過 HTR2B 的 5-HT 信號傳導對糖酵解的調節(jié)。原代 PDAC,無論是否暴露于 SB204741(HTR2B 的選擇性拮抗劑),在小鼠體內(nèi)作為異種移植腫瘤生長,并將 SB204741 施用于荷瘤 KPC 小鼠;通過成像分析測量腫瘤生長和代謝。


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血清素/5-羥色胺(ST/5-HT)elisa試劑盒結果: 在 PDAC 標本的組織微陣列的免疫組織化學分析中,調節(jié) 5-HT 合成和降解的 TPH1 水平升高和 MAOA 水平降低,與 PDAC 的階段和大小以及較短的患者存活時間相關。我們發(fā)現(xiàn)與非腫瘤胰腺組織相比,人類 PDAC 組織中的 5-HT 水平增加,與非轉化胰腺細胞相比,PDAC 細胞系中的 5-HT 水平增加。PDAC 細胞系與 5-HT 的孵育增加了增殖并阻止了細胞凋亡。HTR2B 的激動劑,而不是其他 5-HT 受體,可促進 PDAC 細胞的增殖并阻止其凋亡。在 PDAC 細胞中敲除 HTR2B,或將細胞與 HTR2B 抑制劑一起孵育,減少了它們作為小鼠異種移植腫瘤的生長。我們觀察到 PDAC 細胞中 5-HT 和糖酵解通量之間的相關性;在 5-HT 刺激后,PDAC 細胞中參與糖酵解、磷酸戊糖途徑和己糖胺生物合成途徑的代謝酶水平顯著增加。5-HT 刺激導致 HTR2B-LYN-p85 復合物的形成,該復合物通過增加 MYC 和 HIF1A 的蛋白質水平來增加 PI3K-Akt-mTOR 信號傳導和 Warburg 效應。向 KPC 小鼠施用 SB204741 減緩了已建立的胰腺腫瘤的生長和代謝,并延長了小鼠的存活期。


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