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兔轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)elisa試劑盒目的探討亞低溫預處理肝缺血再灌注損傷(HIRI)大鼠模型的保護作用機理。方法將40只SD大鼠分為4組:假手術(Sham)組、HIRI組、亞低溫處理(MH)組和MH+LY294002處理(MH+LY)組,每組10只,分別于肝缺血再灌注3、6、12、24 h后收集大鼠的血清及肝組織標本。采用Western Blot檢測大鼠肝組織中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt,Ser308)蛋白的表達水平。采用TUNEL法和Western Blot檢測分析肝組織中細胞凋亡和凋亡相關蛋白的表達水平。采用ELISA試劑盒檢測肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平。采用全自動生化分析儀檢測大鼠血清ALT、AST活性。計量資料多組間比較采用單因素方差分析,進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。結(jié)果 HIRI組p-PI3K、p-Akt的相對表達水平明顯低于Sham組,差異均有統(tǒng)計學意義(q值分別為5. 217、5. 456,P值均0. 01);經(jīng)亞低溫處理后大鼠肝組織中p-PI3K、p-Akt的相對表達水平明顯高于HIRI組,差異均有統(tǒng)計學意義(q值分別為10. 434、14. 116,P值均0. 01)。


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脆性X綜合征(fragile X syndrome,F(xiàn)XS)是常見的遺傳性智力低下疾病之一,99%的患者是由FMR1(智力低下基因1)的5’端非編碼區(qū)的CGG三核苷酸重復序列異常擴增或其上游的CpG島過度甲基化引起的FMR1的表達產(chǎn)物FMRP(fragile X mental retardation protein,智力低下蛋白)表達下降或缺失所致。定位于3q28的智力低下相關基因FXR1與FMR1屬同一基因家族,編碼的蛋白質(zhì)都具有與蛋白質(zhì)和RNA結(jié)合特性。本課題在本實驗室前期工作已證明FXR1P與CMAS相互作用的基礎上,進一步研究FXR1P與CMAS相互作用后的生物學效應。 目的:研究FXR1P與CMAS相互作用后的生物學效應,為闡明FXR1的基因功能提供實驗依據(jù)。 方法:1. PCR擴增FXR1基因,將其連接到pcDNA3.1(-)載體上,構建pcDNA3.1(-)/FXR1重組載體,并進行酶切鑒定和測序分析。2.通過Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(-)/FXR1重組載體至大鼠上腺嗜鉻細胞瘤PC12細胞和大鼠血管平滑肌細胞VSMC細胞,并通過western blot實驗檢測轉(zhuǎn)染效率。


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