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| 蔗糖合成酶（SS）活性檢測(cè)試劑盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號(hào)：YX-W-B504
規(guī)格：60T/50S
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蔗糖合成酶（SS）活性檢測(cè)試劑盒 Sucrose Synthase (SS) Activity Assay Kit 
一、蔗糖合成酶（SS）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品描述 蔗糖不僅是重要的光合產(chǎn)物，也是植物體內(nèi)運(yùn)輸?shù)闹饕镔|(zhì)、碳水化合物的貯存形式之一。蔗糖 合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代謝過(guò)程的關(guān)鍵酶，負(fù)責(zé)催化蔗糖合成與分解的可逆反應(yīng)， 其合成活性可催化植物體內(nèi)游離果糖和葡萄糖生成蔗糖。 蔗糖合成酶催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應(yīng)生成蔗糖，蔗糖與間苯二酚反應(yīng)生成有色物 質(zhì)，產(chǎn)物在 480 nm 處具有特征吸收峰，通過(guò)吸光值變化即可表征蔗糖合成酶的活性。 
二、蔗糖合成酶（SS）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品使用說(shuō)明
測(cè)定過(guò)程中所需要的儀器和試劑：可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿、研缽/勻漿器、可調(diào)式移 液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。 1.粗酶液的制備（可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例） 按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱(chēng)取 0.1 g 組織，加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 8000 g 離心 10 min，取上清即為粗酶液，置于冰上待測(cè)。 2.測(cè)定步驟 ①分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 480 nm，蒸餾水調(diào)零。 ②滅活粗酶液的制備：取適量粗酶液沸水浴處理 5-10 min（密封以防止水分散失），冷卻至室溫 后即為滅活粗酶液，可將待測(cè)粗酶液統(tǒng)一進(jìn)行處理。 ③在離心管中依次加入下列試劑： 
充分混勻，25℃準(zhǔn)確反應(yīng) 10 min 
充分混勻，沸水浴處理 10 min（密封以防止水分散失） 冰水浴迅速冷卻至室溫 
吸光值測(cè)定（30 min 內(nèi)完成測(cè)定）：取 1 mL 反應(yīng)液至 1 mL 玻璃比色皿中，測(cè)定 480 nm 處吸光 值，記為 A 測(cè)定、A 對(duì)照、A 標(biāo)準(zhǔn)和 A 空白，計(jì)算?A 測(cè)定=A 測(cè)定-A 對(duì)照，?A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空 白。注：空白管只需測(cè)定 1-2 次，每個(gè)測(cè)定管均需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：以 3.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mg/mL 為橫坐標(biāo)（x），以其對(duì)應(yīng)的?A 標(biāo)準(zhǔn) 為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將?A 測(cè)定帶入公式中得到 x（mg/mL）。 3.蔗糖合成酶（SS）活性計(jì)算 ①按組織蛋白濃度計(jì)算 單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。 
②按組織樣本質(zhì)量計(jì)算 單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。 
注釋?zhuān)篤 樣：反應(yīng)體系中加入粗酶液的體積，0.03 mL；V 提：粗酶液總體積，1 mL；Cpr：樣本 蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，10 min。
三、蔗糖合成酶（SS）活性檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng) ①若測(cè)定吸光值超出標(biāo)準(zhǔn)線性吸光值范圍：高于最高值建議將粗酶液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定；低 于最低值建議適當(dāng)增加樣本量重新制備粗酶液后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改； ②顯色完成后應(yīng)在 30 min 內(nèi)完成測(cè)定； ③為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失，測(cè)定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)（以實(shí)際收到說(shuō)明書(shū)內(nèi)容為準(zhǔn)）， 確認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)定， 過(guò)程中問(wèn)題請(qǐng)您及時(shí)與上海原鑫生物科技工作人員聯(lián)系。
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